martes, 5 de febrero de 2019

Practica Cromatografia BIOLOGÍA V 605,607

 Tilacoides:
 Los tilacoides son membranas planas con una gran relación superficie / volumen. Son vesículas individuales de la membrana fotosintética que se encuentran flotando en el estroma y que no están conectadas con la envoltura del cloroplasto. En los tilacoides se pueden diferenciar dos regiones, la parte en que las membranas adyacentes están apiladas (formando unos agregados denominados grana) y la parte en que las membranas están en contacto con el estroma y que sirve para conectar los grana entre sí. El nombre de grana hace referencia a los pequeños granos verdes distinguibles al microscopio óptico.
Utilizando técnicas de criofractura, aislamiento y separación de las porciones granales y estromáticas se ha llegado a la conclusión de que los tilacoides granales son sólo el 5 % del total. La vesícula está completamente aplanada, por lo que una sección transversal ofrece el aspecto de dos membranas paralelas muy juntas que se unen en los extremos. Generalmente, pueden encontrarse de 40 a 60 granas por cloroplasto y de 5 a 20 tilacoides por grana.
El sistema lamelar está presente prácticamente en todos los cloroplastos, sin embargo, no todos presentan granas. En plantas superiores existe una familia denominada C4, con niveles de fijación de CO2 notablemente superiores a las demás, que contienen dos tipos de cloroplastos: los que tienen grana en las células del mesófilo y los del parénquima perivascular que carecen de ellos.
En la membrana se han podido aislar varios complejos, entre los que cabe destacar las asociaciones entre pigmentos y proteínas, que son los componentes funcionales de la fotosíntesis. Estos están embebidos en la membrana y orientados según sus características físico-químicas.
Las membranas tilacoidales son similares a otros celulares; contienen proteínas y lípidos en una relación 1:1 en peso. La matriz de la membrana es una bicapa lipídica compuesta fundamentalmente por carbohidratos que contienen glicolípidos. Los carbohidratos hidrofílicos están colocados en la superficie, en contacto con el exterior, mientras que las partes hidrofóbicas se proyectan hacia el interior. Embebidos en la membrana se encuentran proteínas funcionales y complejos lipoproteícos. En contacto con las membranas fotosintéticas, o embebidos en ellas, encontramos los componentes de la cadena transportadora de electrones, distribuidos en cuatro partes funcionales:
1-    Los complejos captadores de la luz: formados por pigmento-proteínas.
2-    Los centros de reacción: que reciben la energía absorbida y producen las primeras reacciones fotoquímicas.
3-    La cadena transportadora de electrones y protones, a través de la membrana.
4-    El “coupling factor” responsable de la síntesis química de energía en forma de ATP.
Fotosistema II
El fotosistema II (PSII) es un complejo multiproteico (Seibert, 1993) que se localiza en las membranas granales. Se trata de un conjunto de proteínas de membrana que contiene, al menos, 25 polipéptidos; está presente en todos los organismos fotosintéticos oxigénicos y puede ser dividido en diferentes partes según su funcionalidad. Sus componentes son la antena extrínseca LHCII y la unidad central o “core complex”.
Esta, a su vez, se divide en antenas intrínsecas, el centro de reacción (RCII) y las proteínas extrínsecas asociadas a la fotólisis del agua. El mecanismo del fotosistema II es de especial interés porque permite el uso de agua como única fuente de hidrógeno para la fotosíntesis, lo que tiene importantes consecuencias bioenergéticas adicionales debido a la producción de oxígeno como un producto de desecho.
El complejo fotosintético del PSII cataliza la fotólisis del agua y la transferencia fotoinducida de electrones desde el agua a las plastoquinonas. La unidad central del PSII, también llamada “oxygen evolving core complex” (complejo OEC), puede ser definida como la unidad mínima capaz de producir la separación de cargas, reducir las quinonas y emitir oxígeno como subproducto de la reacción (Ghanotakis y Yocum, 1986).
Una parte de los componentes del complejo interno del PSII están integrados en la membrana tilacoidal, mientras que la otra está compuesta por proteínas extrínsecas fijadas a la superficie lumenal.
El centro de reacción contiene varios polipéptidos: D1, D2 y Cyt b559, mientras que el conjunto del complejo interno contiene además los polipéptidos CP47 y CP43, el extrínseco de 33 kD y otros de menor peso molecular.
La denominación D1 y D2 proviene de los polipéptidos que se resuelven por electroforésis en gel de acrilamida como bandas "difusas" y fueron descubiertos por Chua y Gilham (1977).
Se denomina D1 a la banda correspondiente a "la proteína de 32 kD a la que se ligan herbicidas" y D2 a "la proteína similar a la de 32 kD". Estos dos polipéptidos forman parte del centro de reacción del PSII y tienen ligadas cuatro moléculas de clorofila a, dos feofitinas, un β-caroteno y un hierro no hemínico.
Dos de estas clorofilas forman probablemente el donador primario fotoquímico (P680) del PSII. Estas dos clorofilas son idénticas a las que se encuentran en los complejos de antena, pero su función no es la de captador de luz, sino la de promocionar electrones a un estado superior de energía (Hankamer et al., 1997). En la Figura 1.7 se muestra la estructura tridimensional del PSII.
El centro de reacción del PSII está alimentado por una gran antena captadora de luz, que contiene varios cientos de moléculas de clorofila por centro de reacción. La mayoría de los captadores de luz están localizados en distintos complejos embebidos en las membranas del tilacoide.

El LHCIIb es la forma del LHCII que ha sido estudiada con mayor detalle y es la más abundante con un contenido medio del 40 % de la clorofila tilacoidal. Su composición consiste en 6-13 moléculas de clorofila por apoproteína y dos o tres moléculas de xantofila (Chitnis y Thornber, 1988). Aunque este complejo de antena ha sido aislado in vitro como un monómero, la microscopía electrónica ha demostrado que, in vivo, se agrupan en estructuras triméricas (Kuhlbrandt, 1984, Li, 1985).

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